【如何分离外周血单个核细胞】在免疫学、细胞生物学和临床研究中，外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMCs）是重要的研究对象。PBMCs 包括淋巴细胞（如 T 细胞、B 细胞、NK 细胞）和单核细胞等，具有广泛的应用价值。因此，掌握高效、稳定的 PBMC 分离方法至关重要。
以下是对“如何分离外周血单个核细胞”的总结性介绍，并结合不同方法进行对比分析，便于选择最适合的实验方案。
一、常见分离方法概述
| 方法名称 | 原理 | 优点 | 缺点 |
| 密度梯度离心法 | 利用不同细胞密度差异，在分层液中实现分离 | 操作简便、回收率高 | 需要专用试剂和设备 |
| 磁珠分选法 | 利用特异性抗体标记目标细胞，通过磁力分离 | 纯度高、可定向分离 | 成本较高、操作复杂 |
| 负向选择法 | 通过去除非目标细胞达到分离目的 | 纯度高、保留细胞活性 | 需要多步骤操作 |
| 流式细胞术 | 利用荧光标记和流式细胞仪分选 | 精准、可同时分选多种细胞 | 设备昂贵、技术要求高 |
二、密度梯度离心法详解
原理：
利用聚蔗糖-泛影葡胺（Ficoll-Paque）等密度梯度介质，使血液中的红细胞、粒细胞因密度大而沉到底部，而 PBMC 因密度较小悬浮于介质与血浆之间，从而实现分离。
操作步骤：
1. 抗凝血采集后，加入适量 PBS 稀释；
2. 将稀释后的血液缓慢叠加到 Ficoll-Paque 溶液上；
3. 进行离心（通常为 400–800 g，持续 30 分钟）；
4. 收集界面处的 PBMC 层，洗涤并重悬。
注意事项：
- 血液需尽快处理，避免细胞死亡；
- 离心速度和时间需根据实验条件调整；
- 分离后需进行细胞计数和活力检测。
三、其他方法适用场景建议
| 方法 | 适用场景 | 推荐使用人群 |
| 密度梯度离心法 | 大规模、常规分离 | 实验室研究人员 |
| 磁珠分选法 | 高纯度需求、特定细胞类型 | 免疫学、肿瘤研究 |
| 负向选择法 | 需保留细胞功能状态 | 临床前研究 |
| 流式细胞术 | 多参数分析、精细分选 | 高级实验室、科研团队 |
四、总结
外周血单个核细胞的分离是许多生物医学研究的基础步骤。不同的方法各有优劣，应根据实验目的、资源条件以及对细胞纯度和活性的要求进行选择。其中，密度梯度离心法因其操作简单、效率高，仍是当前最常用的分离手段。对于需要更高纯度或特定细胞亚群的研究，则可考虑磁珠分选或其他高级技术。
合理选择分离方法，不仅能提高实验成功率，还能为后续研究提供高质量的细胞材料。
