Western印迹法，又称免疫印迹法（Western Blot），是一种广泛应用于分子生物学和生物化学领域的技术，主要用于检测特定蛋白质在复杂样本中的存在、表达水平以及分子量大小。该方法结合了凝胶电泳、转膜以及免疫检测等多种技术手段，具有高灵敏度和特异性。

Western印迹法的基本流程可以分为以下几个主要步骤：

1. 样品制备：首先从细胞或组织中提取蛋白质，通常使用裂解液将细胞膜破坏，释放出细胞内的蛋白质。提取的蛋白质需要进行定量，以确保后续实验的准确性。

2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：将提取的蛋白质样品加入到含有十二烷基硫酸钠（SDS）的凝胶中进行电泳。SDS能够使蛋白质带上负电荷，并使其按照分子量大小在电场中迁移。较小的蛋白质移动得更快，较大的则较慢，从而实现蛋白质的分离。

3. 转膜：电泳完成后，将凝胶中的蛋白质转移到固相载体上，通常是硝酸纤维素膜或PVDF膜。这一过程称为“转膜”，常用的转移方法包括湿转和半干转。

4. 封闭与抗体孵育：转膜后，膜通常会用脱脂奶粉或牛血清白蛋白（BSA）进行封闭处理，以减少非特异性结合。随后，将膜与针对目标蛋白的一抗孵育，一抗能够特异性地识别并结合目标蛋白。之后，再与标记有酶或荧光的二抗孵育，二抗可识别一抗，从而间接标记目标蛋白。

5. 显影与分析：最后，通过化学发光、荧光或显色反应等方法检测信号，确定目标蛋白的存在及其相对含量。图像分析软件可用于量化结果，进一步评估蛋白质的表达水平。

Western印迹法因其高特异性和灵敏度，在疾病研究、药物开发、基因功能分析等领域发挥着重要作用。然而，该方法也存在一定的局限性，例如对蛋白质浓度要求较高、操作步骤繁琐以及可能受到交叉反应的影响等。

总的来说，Western印迹法是一种经典而有效的蛋白质检测技术，其原理清晰、应用广泛，是现代生命科学研究中不可或缺的工具之一。